石蜡切片的原理和基本步骤？
1. 固定：
将新鲜组织切成小块，固定于4%多聚甲醛过夜。凝固组织中的物质成分，尽可能保持其活体时的结构。同时能使组织硬化，有利于切片的进行。
2.脱水：
为了减少组织材料的急剧收缩，应使用从低浓度到高浓度递增的顺序进行经70%、85%、95%直至纯酒精（无水乙醇），每次时间为1小时。固定后的组织材料需除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀，否则会影响后期的染色效果。
3.透明：
常用的透明剂有二甲苯，二甲苯是石蜡的溶剂。纯酒精不能与石蜡相溶，还需用能与酒精和石蜡相溶的溶剂，替换出组织内的酒精。材料块在透明剂浸渍过程称透明。
4.浸蜡：
先把组织材料块放在熔化的石蜡和二甲苯的等量混合液浸渍1小时。先后移入2个熔化的石蜡液中浸渍1小时左右。
5.包埋：
以少许热蜡液将其底部迅速贴附于包埋盒内上，然后置于速冻台，让石蜡固定。
6.切片：
切片刀的锐利与否、蜡块硬度是否适当都直接影响切片质量，可将蜡块至于冷水中改变蜡块硬度。通常切片厚度为3-5um，用毛笔轻托轻放在37度水浴中展片。
7.贴片与烤片：
一般使用恒温水浴锅，温度控制在37-40℃左右，有利于石蜡切片的展开，贴好的切片置于60℃恒温箱内干燥2小时，蛋白质凝固后即可染色。
8.切片脱蜡及水化：
干燥后的切片置于二甲苯中进行脱蜡，然后依次使用从高浓度到低浓度递减的顺序进行经纯酒精、95%、85%、70%进行水化。
9.染色：
经典的苏木精和伊红：细胞核被苏木精染成紫蓝色，多数细胞质及非细胞成分被伊红染成粉红色。实验操作简单。
免疫组化：指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应。
延伸阅读
石蜡切片厚度？
用于光镜观察的石蜡切片厚度一般是5～10μm。活的细胞或组织多为无色透明，各种组织间和细胞内各种结构之间均缺乏反差，在一般光镜下不易清楚区别出；组织离开机体后很快就会死亡和产生组织腐败，失去原有正常结构。
因此，组织要经固定、石蜡包埋、切片及染色等步骤以免细胞组织死亡，而能清晰辨认其形态结构。
冰冻切片和石蜡切片的优缺点？
冰冻切片和石蜡切片各自的优劣之处是什么
1、从一抗的选择方面来看。有的一抗既能做石蜡切片又能做冰冻切片，而有的一抗只能做冰冻切片，关键取决于所要检测的抗原稳定性，有的抗原不稳定，经过组织固定，脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等一系列的做石蜡切片的步骤，所检测的抗原易被破坏，这时只能用冰冻切片来做，检测这类抗原的一抗只能做冰冻切片，而那些稳定的抗原，能经受住石蜡切片的的考验，一般来讲也可以用冰冻切片来做，总得来讲，对于既可以用冰冻切片也可以用石蜡切片检测的抗原，用石蜡切片检测的染色效果要比冰冻切片好一些。2、从研究目的来看。石蜡切片对组织细胞的定位很准确，而长期冻存组织的冰冻切片可能因冰晶的形成破坏组织细胞形态的结构，并造成抗原的弥散，从而定位不准确。3、从抗原的保真性来看。冰冻切片对抗原的保真很好，而石蜡切片在组织固定，脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等过程中可能会对抗原的性质造成影响。4、从操作步骤的繁琐程度看。染色过程冰冻切片简单，而石蜡切片要求脱蜡入水、抗原修复等过程，比较繁琐。5、总之，石蜡切片对标本的长期保存较合适，且组织细胞形态结构保持好；而冰冻切片适合对新鲜组织的制片，然后立即固定、染色效果较好，且免疫荧光中可以相对避免石蜡自发荧光的干扰。（
快速石蜡切片什么意思？
石蜡切片。
这是组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法。石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。
石蜡切片的制作步骤（附图）？
1、取材
确定所取材料的来源及部位，纵切还是横切；取材要迅速，防止阻止发生进一步变化，材料体积要适宜，下图为植物芽体取样实拍。
2、固定
最常用的固定液为FAA（万用固定液）。它的优点是材料固定时间不受限制，固定时间短则数小时，长则数月或数年。冲洗或漂洗：组织固定后应充分水洗，除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀，否则会影响以后的染色效果。下图为固定液浸泡的组织切块。
3、脱水
目的：水和透明剂不能互溶，只有脱去水分后，才能让透明剂进入。
试剂：梯度酒精溶液
流程：70%—85%—95%–100%— 100% 每步1h-2h左右。
注意事项：保证脱水梯度和每一步脱水时间，水要完全脱净，但也不能过度脱水（过久使组织变脆、收缩，这个时间大家可以根据自己的实验来摸索一下，不必完全按照本操作来）。
下图为自动组织脱水机，适于大量样品组织脱水用。如果材料体积及样品量较少可用小烧杯做容器来进行逐级脱水。
4、浸蜡与包埋
目的：用石蜡取代透明剂，使石蜡浸入组织而起支持作用。
浸蜡程序:(恒温)
（1）低温浸蜡（36℃）：接上步，在有二甲苯和材料的烧杯中逐步加碎蜡至过饱和（石蜡不能溶解），过夜12-24h。
（2）高温浸蜡（55-60℃，高于石蜡熔点3℃ ）：
将上步二甲苯与石蜡的混合液倒出，不要倒掉材料，将烧杯中加入纯石蜡，共5-24h。纯石蜡需要更换三次。
关于石蜡的选择石蜡熔点：
对于较硬的材料，用熔点较高的石蜡进行包埋；
当切片较薄时（在8μm以下），选用熔点较高的石蜡包埋；
夏季宜采用熔点较高的石蜡（56,58℃）,冬季宜选用熔点较低的石蜡（52,54℃）。
5、切片
传统的切片方法是将包埋好的蜡块用刀片修成规整的梯形，粘于小木块上，上机切片。
新型的切片方法是将包埋框（见下图）代替木块的支撑作用，上机切片。切片的厚度可以根据自己的实验要求来确定，一般在8μm-20μm范围内。（下图为传统切片机与新型自动切片机）
6、粘片与烤片
粘片：用粘片剂将蜡片牢附于载玻片上，防止在后续的操作中材料脱落。在载玻片上涂抹粘片剂（甲液），再滴蒸馏水（乙液），放上蜡片，用滤纸吸取多余的水分。
烤片：将载玻片放于40℃展片台中烤干。
7、脱蜡与复水、染色
脱蜡目的：干燥后的切片需脱蜡及复水才能在水溶性染液中进行染色。
复水目的：脱蜡后的材料，如果不经过复水，直接进入染色剂中，材料将会严重变形，甚至难以染色。
染色目的：使细胞组织内的不同结构呈现不同的颜色和足够强的差异以便于观察。
总体流程：二甲苯→1/2 二甲苯+1/2纯酒精→100%酒精→95％酒精→85％酒精→番红（4h以上）→95％酒精→固绿（迅速）→95％酒精（迅速）→100%酒精→1/2 二甲苯+1/2纯酒精→二甲苯→二甲苯，以上各级约需5～10分钟，已注明时间的除外。
染色剂：1%番红（85%酒精配制）
0.5%固绿（95%酒精配制）
8、切片脱水、透明和封固
接上步，在载玻片上滴加适量（1～2滴）中性树胶，再将洁净盖玻片倾斜放下，进行封片。切片放入42℃温箱中干燥过夜。镜检，将合格的切片贴上标签。 封固剂选择加拿大树胶（Canada balsam）或中性树胶。至此，植物组织的石蜡切片大功告成！（下图为加拿大树胶）
