磷酸盐缓冲液的配制
PBS是磷酸盐缓冲液(PhosphateBuffer Saline),是生物学实验室最常用的缓冲液之一。其主要成分包括:氯化钠(NaCl)、氯化钾(KCl)、磷酸氢二钠(Na2HPO4)和磷酸二氢钾(KH2PO4)。如何快速且高效的配制PBS缓冲液呢?首先我们需要配制10X的PBS母液,然后再对其母液进行1:10稀释即可获得PBS缓冲液。这样做有两个巨大的优势:1,可以一劳永逸;2,减小误差。下面为大家进行介绍。
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准备材料
NaCl 58.44 g/mol(终浓度136mM)
KCl 74.55 g/mol(终浓度2.6mM)
Na2HPO4 141.96 g/mol(终浓度10mM)
KH2PO4 136.09 g/mol(终浓度2mM)
烧杯两个、微波炉或水浴锅、量筒、磁力搅拌器及配套的转子
开始配制
1. 清洗干净所需烧杯、转子和量筒,向一个烧杯装少量去离子水(约100ml)并放入一个转子后放在称量天平旁备用;向另一个烧杯装约800ml去离子水并在微波炉或者水浴锅(65°以上均可)中加热。
2. 按照如下表格称量试剂并倒入天平旁的烧杯中。
NaCl 8.0 g
KCl 0.2 g
Na2HPO4 1.42 g
KH2PO4 0.27 g
**注意:由于实验室所购买的Na2HPO4常常带有二水、七水或者十二水,与之对应的重量分别为1.78g、2.68g、3.58g。
3. 向烧杯中加入预热的去离子水,烧杯放置在磁力搅拌器上搅拌溶解。用量筒定容到1L,保存备用。
4. 取100ml 10X的PBS母液,加入900ml去离子水即可获得pH=7.4的PBS缓冲液(无需用pH计校准PH值)。
总结
>加入去离子水可以更快速的溶解盐离子,而对PBS无影响。
>PBS可以高温高压灭菌后长期保存,也可以过滤除菌后长期保存。
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